|
Врачи поощряют ежедневное употребление овощей и фруктов, чтобы не только улучшить работу мозга, но и предотвратить возможные проблемы с памятью и слабоумие в пожилом возрасте.
Полученные в процессе клинических исследований зубной пасты
R
.
O
.
C
.
S
. данные о значительном улучшении гигиенического состоянии полости рта, отмеченная и исследователями и испытуемыми задержка скорости отложения зубного налета [1, 2] побудили нас к проведению дополнительных исследований влияния протеолитического фермента бромелаина (одного из ключевых компонентов запатентованного состава) на антиадгезивные свойства зубной пасты
Установление взаимодействия между патогенноми клеткой-мишенью в результате бактериальной адгезии
является определяющим звеном в ходе инфекционного про
цесса. Прикрепление и последующее размножение микроорганизмов с образованием микроколоний и/или пленки обеспечи
вает им более выгодные условия существования, связанные,
в частности, с противодействием механическому удалению бак
терий из макроорганизма. Доказано, что адгезивность болезне
творных микроорганизмов часто коррелирует с их патоген
ностью и вирулентностью. Так,
на авиру
лентном штамме
Escherichia
coli
, было продемонстрировано, что перенесенная плазмида,
контролирующая синтез антигена К88, усиливает не только
адгезию микроорганизмов к щеточной каемке энтероцитов
, но и вирулентность экспериментально изменен
ного штамма
[3, 4, 5]. А
дгезия
E
.
Coli
к уроэпителию приводит не только к механическому закреплению микроорганизма в новой экологической нише, но и вызывает адекватную новым условиям перестройку метаболизма. Кроме перестройки метаболизма, механический контакт и связывание Р-ворсинок с клеткой эпителия ведут к изменению механизма сборки новых ворсинок (они становятся короче) и являются сигналом к экспрессии ряда генов вирулентностиE.coli(комплексарари гемолизина) [6].
Молекулярный механизм бактериальной адгезии являетсяуниверсальным для патогенных и комменсальных форм, чтоподтверждено на примере микрофлоры верхних дыхательных
путей, нижних отделов пищеварительного и мочеполового трак
тов [7]. Основой взаимодействия любых биоло
гических систем и межклеточных коммуникаций служит лиганд-
рецепторное узнавание [8, 9]
, при котором меньший по размерам и молекулярноймассе участник называют лигандом (например, поверхностные структуры клеточной стенки бактерий), а его более крупныйкомплементарный партнер — рецептором (например, сайты свя
зывания на цитолемме эукариотической клетки).
Лиганды и рецепторы представляют собой полимеры гликолипидной или гликопротеинной природы, состоящие из множественных копий уникальных в каждом случае субъединиц и определяющие тропизм различных патогенов к своим клеткам-мишеням [10]. Именнопоследнее обстоятельство способствует колонизации бакте
риями тканей макроорганизма с повышенной плотностью рецепторов [9].
In
vivo
на процесс адгезии
существенное влияние оказывают растворенные компонентыбиологических жидкостей и секретов, с которыми патогены
чаще встречаются до контактов с клетками-мишенями и кото
рые по химическому строению аналогичны клеточным рецепто
рам.
Orksov
a
.
Birch
-
Anderson
(1980) [11] продемонстрировали, что
Е.
coli
адгезируют к муцину слюны раньше, чем к эпителию
ротовой полости. Способностью адсорбировать белковые компоненты слюны обладают стрептококки полости рта (Streptococcus sanguis, S. Mitis, S. Salivarius), причем в исследовании было показано, что нарушить эту адгезию возможно с помощью протеолитического фермента трипсина [12].
Показатели адгезии как многофакторного процесса зависятот большого числа условий, как со стороны бактерий, так
и макроорганизма. Известно, что видовая принадлежность
в значительной степени характеризует адгезивные свойства
бактерий. Так,
Streptococcus
mutans
практически не фикси
руется на эпителиоцитах языка и щек, но необратимо прикреп
ляется к поверхности зубов [13].
Arbuth
nott
a
.
Smith
(1979)[5] отмечают, что адгезивность
St
.
pyogenes
к эпителиальным клеткам ротовой полости в 6 раз выше, чем
у Е.
coli
.
Для це
лого ряда микроорганизмов показана прямая связь степени
гидрофобности клеточной поверхности и адгезивности. Так,
St
.
aureus
из гнойных очагов более гидрофобен, чем из окру
жающей среды, полости носа, поверхности кожи [4]
.
К факторам, влияющим на адгезивные свойства тканей
и клеток хозяина, относится индивидуальное состояние пациен
та: высокая степень колонизации эпителиоцитов ротовой по
лости
Str
.
pyogenes
у больных различными воспалительными заболеваниями, снижение этого показателя у носителей и прак
тически полное отсутствие у здоровых людей [4].Существует разница в прикреплении микроорганизмов к раз
ным участкам в пределах одного макроорганизма. Для
Str
.
sa
livarus
и
St
.
aureus
нижняя поверхность языка рассматри
вается как богатая рецепторами зона и наиболее благоприятная
для инвазии область [13]. На вариабельность рецепторного аппарата эпителиоцитов может оказы
вать влияние и гетерогенность клеточной популяции, обусловленная физиологическими изменениями поверхностных структур клеток при дифференциации или старении. Патологическиеизменения тканей макроорганизма создают дополнительные
условия, способствующие адгезии микроорганизмов [14]
.
Изучение молекулярной природы лиганд-рецепторных комплексов, образующихся при взаимодействии различных бактерий с
соответствующими им клетками-мишенями, а также факто
ров, влияющих на процесс адгезии
in
vivo
и
in
vitro
, позволяет разработать профилактические меры, направленные на подав
ление ранних этапов инфекционного процесса.
В основе поисков антиадгезивных препаратов лежит созда
ние эффективных препятствий с разнообразными механизмами
действия при установлении взаимодействия между лигандами
и рецепторами. Одним из наиболее известных механизмов,
с учетом которого осуществляется подбор ингибиторов процессаадгезии, является введение в систему бактерии – эукариотиче
ские клетки растворимых веществ, конкурирующих с лигандами или рецепторами за места связывания на клеточных поверхностях [9]
. При этом все растворимые соединения
можно разделить на две группы, способные реагировать либо
с бактериальными, либо с эукариотическими клетками. Изби
рательное связывание лигандов микроорганизмов предпочти
тельнее, так как в меньшей степени влияет на рецепторный
аппарат клеток-мишеней, а через него на самые разнообразные
процессы в тканях макроорганизма [15].
К настоящему времени известны многочисленные экспери
ментальные доказательства того, что применение природных
или синтетических аналогов клеточных рецепторов и компонен
тов тканевых жидкостей способно значительно снизить, а в от
дельных случаях и полностью предотвратить прикрепление
микроорганизмов к клеткам хозяина [9, 15, 16]. Установлены факты
взаимодействия бактериальных лигандов с белками, гликопро
теинами плазмы крови (иммуноглобулинами классов А и
G
,
р2-микроглобулином, фибриногеном, фибронектином, альбуми
ном, трансферрином, а также некоторыми другими [4, 16, 17]
, мочи (ТН-белком) [18,19], слюны
(муцином, агглютининами) [20], что позвол
ило использовать большинство из перечисленных выше соеди
нений в экспериментальных и клинических условиях в качестве
ингибиторов бактериальной адгезии. Сегодня имеются данные об антиадгезивном действии экзогенных протеолитических ферментов. Действие ферментов не ограничивается изменением характера прилипания бактерий к мишени, но и приводит к нарушению уже сформированных колоний. Разные ферменты демонстрируют различный уровень эффективности.
Результаты аналитических исследований указывают на специфичность такого влияния. [21]
Задачей
настоящего исследования было оценить влияние зубной пасты, содержащей бромелаин на адгезию микроорганизмов, обитающих в полости рта человека.
Материалы и методы
.
Материалы:
Исследована зубная паста
.включающая бромелаин.
Контролем служила зубная паста аналогичной рецептуры без бромелаина.
Исследование проводилось слепым методом. Тестируемые образцы были обозначены условными номерами 56 (
R
.
O
.
C
.
S
.) и 57 (контроль).
Тест
-
культуры
микроорганизмов
:
Клинические
штаммы
микроорганизмов
,
выделенные
из
ротовой
полости
волонтеров
: Staphylococcus aureus 20, Streptococcus salivarius 67, Streptococcus sangius 12, Streptococcus sobrinius 83.
Культура клеток: кожно-мышечных фибробластов эмбриона человека.
Оборудование:
бактериологические анализаторы –
IEMS
-фотометр фирмы
LabSystems
(Финляндия),
BBL
Crystal
фирмы
Becton
Dickenson
(США); система ввода изображений «Видео-ТЕСТ-морфология» (Германия).
Методы.
Микробиологические, морфологические.
Все исследования проводили в 3-х повторениях.
1-
ый
этап
.
Путем
прямого
посева
тампоном
из
полости
рта
у
10
волонтеров
на
5%
кровяной
агар
получены
чистые
культуры
микроорганизмов
Staphylococcus aureus 20, Streptococcus salivarius 67, Streptococcus sangius 12, Streptococcus sobrinius 83.
Полученные штаммы были идентифицированы на вышеперечисленных бактериологических анализаторах.
2-ой этап.
Изучена антиадгезивная активность тестируемых паст на культуре клеток (КК) кожно-мышечных фибробластов эмбриона человека. Фибробласты выращивали в пробирках Лейтона на покровных стеклах в ростовой питательной среде Игла 24 часа при 37 град. С до образования конфлюэнтного монослоя по методике Грабовской К.Б., Тотолян А.А., 1977 [22].
Затем ростовую среду сливали и добавляли по 1,8 мл тестируемых образцов паст и по 0,2 мл суточной культуры соответствующего тест-штамма в дозе 10 в восьмой степени КОЕ/мл и инкубировали 2 часа при 37 градю. С.
После инкубации клетки монослоя отмывают от неприкрепившихся бактерий многократной сменой среды Игла, фиксируют 96 этиловым спиртом, окрашивают по Романовскому-Гимза и исследуют микроскопически.
Опыты по оценке подавления адгезии тест-штаммов тестируемыми пастами проводили с разведением каждой пасты 1:20000 в присутствии 50% сыворотки человека.
Интенсивность процесса адгезии тест-штамма оценивали по следующим показателям: 1) индекс адгезии (ИА) выражают средним числом бактериальных клеток на одной эукариотической клетке; 2) процент пораженных клеток монослоя (ПК%); 3) обсемененность 100 клеток монослоя – микробную нагрузку (МН) – определяют по формуле МН= ИА х ПК%.
Степень адгезии микроба определяют по показателю микробной нагрузки относительно контроля, принимаемого за 100%.
В опыте использовали 2 экспозиции – 2 часа и 3 минуты с концентрацией 1:20000, практически не вызывающей повреждения монослоя клеток. (рис. 1, 2, 3, 4).
Как видно из таблицы 1, препараты 56 и 57 недостаточно интенсивно подавляли адгезию тест-микроорганизмов при экспозиции 2 часа - % подавления адгезии составил соответственно в отношении:
-
S
.
aureus
– 28% и 16%;
- Str.salivarius – 30%
и
17%;
- Str.sangius – 26%
и
13%;
- Str.sobrinius – 31%
и
17%.
Как видно из таблицы 2, при сокращении времени экспозиции до 3 минут эффективность препаратов 56 и 57 резко повышалась - % подавления адгезии составил соответственно в отношении:
-
S
.
aureus
– 80% и 70%;
- Str.salivarius – 80%
и
70%;
- Str.sangius – 83%
и
72%;
- Str.sobrinius – 79%
и
67%.
Во всех случаях препарат 56 (
R
.
O
.
C
.
S
. с бромелаином) был более эффективен, чем препарат 57.
Заключение
Эффективность препаратов для подавления адгезии нормальной микробиоты ротовой полости зависит от экспозиции: при 2-часовой экспозиции эффективность зубных паст невысокая, а при времени выдержки 3 минуты – она резко возрастает – до 70-80% подавления адгезии штаммов микроорганизмов. При этом 3 минуты – обычное время для чистки зубов. Это, по-видимому, связано с обратимостью адгезии в короткие сроки после внесения штаммов в модельную систему, т.к. обычно через 1-2 часа адгезия становится необратимой.
Полученные результаты свидетельствуют о перспективности разработки данных рецептур, особенно препарата 56 ( зубная паста
. с бромелаином), как средств для профилактики формирования микробной биопленки в полости рта.
Таблица 1. Адгезивная активность тест-штаммов в присутствии тестируемых паст 56 («РОКС») и 57 (контроль) при экспозиции 2 часа
Таблица 2. Адгезивная активность тест-штаммов в присутствии тестируемых паст 56 (
R
.
O
.
C
.
S
) и 57 (контроль) при экспозиции 3 минуты
Рис. 2. Клетки + Str. Salivarius 67
Рис. 3. Культура клеток + Str. Salivarius 67 + з.п. 56 (1:20000) экспозиция 2 часа
Рис. 4. Культура клеток + Str. Salivarius 67 + з.п. 56 (1:20000) экспозиция 3 минуты
Г.Е. Афиногенов д.м.н., профессор, А.Г. Афиногенова к.ф.н, Е.Н. Доровская
ФГУ «РНИИТО им.Р.Р. Вредена Росздрава», Санкт-Петербург,
А.В. Гроссер, ООО WDS, Москва
С 11 октября текущего года японская «скорая помощь» переходит на новую систему обработки вызовов. Теперь большинство подобных звонков будут проходить через компьютер.
Весь разговор в данном случае будет записываться и направляться на пятиступенчатую обработку. Компьютер самостоятельно сможет определить состояние больного, степень необходимости принятия срочных медицинских мер и даже направить к звонящему бригаду «скорой помощи».
Медики уверены, что данная система поможет людям экономить время и быстрее оказывать помощь именно тем гражданам, которые в ней нуждаются больше всего. Сейчас время от вызова «скорой помощи» до приезда бригады врачей составляет примерно шесть минут. Однако пока достаточно много времени тратится на обработку звонков тех людей, чьи случаи не требуют принятия экстренных мер. Компьютеры должны помочь исправить эту ситуацию
Бесплатно проверить свое сердце смогут москвичи и гости столицы в течение лета на ВВЦ
Вирусные гепатиты.
Ученые открыли чудодейственные свойства чая
Иппотерапия - лечение верховой ездой
Аптеки работают по записочкам
Тульская область: Отказавшихся от соцпакета на 2007 г. стало больше на 6,5%
Не бойтесь черной пятницы!
Набрать вес или как поправиться без проблем!
Гармония гормонов с новым оральным контрацептивом ДЖЕС!
Потеря работы серьёзно вредит здоровью
|